紫外可見分光光度計系統(tǒng)的使用方法

　　儀器名稱：紫外/可見分光光度計系統(tǒng)

　　儀器型號：Lambda 25

　　生產(chǎn)廠家：perkinElmer

　　使用方法：

　　開機步驟

　　1 開光譜儀電源

　　2 開計算機電源

　　3 在文件管理器中用鼠標指按UV WinLab圖標，此時出現(xiàn)UV WinLab的應(yīng)用窗口，儀器已準備好，可選用適當方法進行分析操作。

　　2方法：

　　在分析中必須對分光光度計設(shè)定一些必要的參數(shù)，這些參數(shù)的組合就形成一個“方法”。Lambda系列UV WinLab軟件預(yù)設(shè)四類常用方法。

　　1)掃描(SCAN),用以進行光譜掃描。

　　2)時間驅(qū)動(TIME DRIVER),用以觀察一定時間內(nèi)某種特定波長處縱坐標值的變化，如酶動力學。

　　3)波長編程(WP)用以在多個波長下測定樣品在一定時間內(nèi)的縱坐標值變化，并可以計算這些縱坐標值的差或比值。

　　4)濃度(CONC)用以建立標準曲線并測定濃度。

　　2.1 進入所需方法，在方法窗口中選擇所需方法的文件名。

　　2.2 方法的設(shè)定

　　2.2.1 掃描、波長編程及時間驅(qū)動

　　各項方法可根據(jù)顯示的參數(shù)表，逐項按需要選用或填入，并可參考提示。

　　2.2.2 濃度

　　濃度方法窗口下方標簽較多，說明做濃度測定時需要參數(shù)較多。用鼠標指按每一標簽，可翻出下頁，其上有一些需要測定的參數(shù)。必須逐頁設(shè)定。

　　3 工具條

　　3.1 SETUP

　　當所需的各項參數(shù)都已在參數(shù)中設(shè)好后，必須用鼠標指按SETUP，才能將儀器調(diào)整到所設(shè)狀態(tài)。

　　3.2 AUTOZERO

　　用鼠標指按此鍵，分光光度計即進行調(diào)零(在光譜掃描中則進行基線校正)。

　　3.3 START

　　用鼠標指按此鍵，光度計即開始運行所設(shè)定的方法。

　　4 方法運行

　　4.1 掃描，時間驅(qū)動，波長編程

　　方法選好后，先放入?yún)⒈热芤�，按AUTOZERO鍵，進行自自動校零或背景校正結(jié)束后再放入樣品，按START，分光光度計即開始進行，同時屏幕上出現(xiàn)圖形窗口，將結(jié)果顯示出來。

　　4.2 濃度

　　4.2.1制訂標準曲線

　　1 方法選好后，確認各項數(shù)據(jù)正確，特別是REFS頁中第一行要選中右上角的“edit mode”。再放入?yún)⒈热芤�，按AUTOZERO鍵自動校零或背景校正。

　　2 按setup,待該圖標消失后，再按“start”,按提示依次放入標準色列的各管溶液，每次都按提示進行操作。

　　3 標準色列測定 完畢后，屏幕上出現(xiàn)calibgraphwindow,顯示擬合的標準線，并標出各項標準管的位置，屏幕下方還有一條Concentration mode的對話框，可以用來修改擬合的曲線類型(按 change calbration),或修改標準溶液的任何一管(replace),或取消某一管(delete),或增加標準溶液管數(shù)(add)。如過已經(jīng)滿意，則按analyse sample鍵，進入樣品測定窗口。

　　4 標準曲線有關(guān)的各項數(shù)據(jù)，均在calibresultwindow中，可用鼠標將其調(diào)出觀察。其中包括每個標準溶液的具體數(shù)據(jù)，標準曲線的回程方程式，相關(guān)系數(shù)，殘差。

　　4.2.2樣品濃度測定

　　4.2.2.1剛制定好的標準曲線接著進行樣品濃度測定時

　　1 只需在concentration mode對話框按analyse sample鍵，進入樣品測定窗口。

　　2 按設(shè)定的樣品順序放入各樣品管，每次按提示進行操作。

　　3 屏幕上出現(xiàn)結(jié)果窗口，結(jié)果數(shù)據(jù)將依次顯示在樣品表中的相應(yīng)位置。

　　4.2.2.2利用原有的標準曲線接著進行樣品濃度測定時

　　4.2.2.2.1 調(diào)出所測定樣品的濃度方法文件，首先調(diào)出refs頁，將原設(shè)edit mode選項取消，改設(shè)左上角的using exiting calibration。重新將方法存盤，則今后再調(diào)用時即不需再作修改。

　　4.2.2.2.2 在sample頁中按要求重設(shè)各種樣品名稱機樣品信息。

　　4.2.2.2.3 按工具條中setup鍵，將主機設(shè)到該方法所設(shè)定的條件。

　　4.2.2.2.4 將參比溶液放入比色室，按autozero鍵做背景校零。

　　4.2.2.2.5 按start鍵，按設(shè)定的樣品順序放入各樣品管，每次按提示進行操作。

　　4.2.2.2.6 屏幕上出現(xiàn)結(jié)果窗口，結(jié)果數(shù)據(jù)將依次顯示在樣品表中相應(yīng)位置。

　　5關(guān)機

　　5.1 將方法及數(shù)據(jù)存盤

　　5.2 關(guān)閉方法窗

　　5.3 退出UV WinLab

　　5.4 取出樣品及參比溶液

　　5.5 清潔光譜儀，特別是樣品室

　　5.6 關(guān)閉光譜電源

　　5.7 關(guān)閉計算機電源。