提取動(dòng)物組織DNA的方法

　　【實(shí)驗(yàn)步驟】

　　1.組織塊解凍，用生理鹽水洗去血污，剪取約0.5g組織，剪小放入2.0ml離心管中，用FM-200P研磨45秒;

　　2.加入0.45ml TES混勻，再加入50ul SDS(10%)，5.0ul蛋白酶K(20mg/ml)，充分混勻后，于56°C保溫4-6h，每2h搖1次。

　　3.放置到室溫，加入等體積飽和酚(500ul)，顛倒混勻，10000r/m，離心10m，分離水相和有機(jī)相，小心吸取上層含核酸的水相，到一個(gè)新的1.5ml離心管。

　　4.加入等體積酚：氯仿：異戊醇(25：24：1)，顛倒混勻，10000r/m，離心10分鐘，取上層轉(zhuǎn)移到新的1.5/2.0ml離心管中;

　　5.加入等體積氯仿：異戊醇(24：1)，顛倒混勻，10000r/m，離心10分鐘，取上層清液到一個(gè)新的1.5/2.0ml離心管;

　　6.加入2.5倍體積的-20°C預(yù)冷的無(wú)水乙醇沉淀DNA，觀察現(xiàn)象。

　　7.12000 r/m，離心10分鐘，棄乙醇;

　　8.-20°C保存的75%乙醇洗滌，10000 r/m，離心5分鐘，去乙醇，55°C干燥DNA;

　　9.加入適量TE溶解DNA(具體依DNA的多少而定)，-20°C保存?zhèn)溆?

　　【注意事項(xiàng)】

　　1.抽提每一步用力要柔和，防止機(jī)械剪切力對(duì)DNA的損傷。

　　2.取上層清液時(shí)，注意不要吸起中間的蛋白質(zhì)層。

　　3.乙醇漂洗去乙醇時(shí)，不要蕩起DNA。

　　4.離心后，不要晃動(dòng)離心管，拿管要穩(wěn)，斜面朝外。