防脫片處理步驟

　　《一》載玻片和蓋玻片的處理

　　將載玻片或培養(yǎng)用的小蓋片浸泡在重鉻酸鉀濃硫酸清潔液中24小時(shí)，然后流水充分沖洗，再用蒸餾水沖洗3遍以上，而后置95%乙醇中12小時(shí)。取出擦干或烤干，貯放于玻片盒內(nèi)備用。蓋玻片很薄，以上處理程序必須縮短時(shí)間，清潔液浸泡只需2小時(shí)，流水沖洗注意勿損傷玻片。

　　《二》黏附劑的使用

　　1.多聚左旋賴氨酸(poly-1—lysine) 首先配制0.1%(ω/υ)多聚左旋賴氨酸濃縮液，室溫下(18～26℃)可保存1年。使用時(shí).將試劑10倍稀釋成工作液，濃度為0.01%(ω/υ)，2—8℃冰箱保存，有效期3個(gè)月。使用方法是將充分洗凈和預(yù)先干燥的玻片浸泡于稀釋后的多聚左旋賴氨酸溶液數(shù)十秒或提拉十次，瀝干.于室溫下晾干12—24小時(shí)或在45℃以下烤箱內(nèi)烘干。處理后的玻片避光干燥可長(zhǎng)期保存。

　　2.3—氨丙基—乙氧基甲硅烷(3—amino propyltriethoxy silane，APES) APES必須現(xiàn)用現(xiàn)配。用此方法黏合的玻片應(yīng)垂直烤片而不能水平烤片，否則，組織片中易出現(xiàn)氣泡。APES的使用方法：用丙酮50倍稀釋(APESl份、丙酮49份混合)，將洗凈的玻片放人稀釋好的APES中，停留20～30秒，取出稍停，再人純丙酮或蒸餾水中涮去未結(jié)合的APES。置通風(fēng)櫥中晾干即可。注意用APES防脫片處理的載玻片撈片時(shí)組織應(yīng)一步到位.并盡量減少氣泡存在，以免影響染色結(jié)果。注意不要將APES與其他防脫片劑混合使用。

　　多聚左旋賴氨酸為目前免疫組織化學(xué)染色中最常用的防脫片劑，適合于需要酶消化、微波、高溫高壓的防脫片處理。如效果不佳，可用雙重處理(APES和poly-l-lysine)的切片。在以上兩種方法均無(wú)效的情況下，可用如下方法：切片在脫蠟前放在APES l：50丙酮溶液中浸泡3分鐘，晾干后即可進(jìn)行下一步驟。

　　《三》免疫組織化學(xué)染色中常見(jiàn)脫片原因

　　1.組織固定、脫水、透明不充分。

　　2.組織切片過(guò)厚。

　　3.組織切片有折疊。

　　4.過(guò)度的熱抗原修復(fù)(高壓、微波、水煮)處理或抗原修復(fù)液的pH偏高。

　　5.操作過(guò)程中，沖洗方法不正確等。