細胞培養(yǎng)四部曲

　　1.細胞培養(yǎng)：細胞培養(yǎng)條件為含有 10% 胎牛血清的培養(yǎng)液(根據(jù)不同的細胞選擇合適的細胞培養(yǎng)液)，37℃下在含有 5% CO2 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

　　2.細胞凍存：細胞消化后收集， 1000rpm 離心 5min ，去上清，用 1ml 含有 10% DMSO的培養(yǎng)液重懸，逐級降溫后轉入-70℃凍存 24h，轉入液氮中長期保存。

　　3.細胞復蘇：將液氮中凍存的細胞取出， 37℃水浴中融化，取出后 1000rpm 離心 5min ，去上清，用培養(yǎng)液重懸后接入培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

　　4.細胞傳代：對于貼壁細胞將培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中的培液吸干， 用滅過菌的 1×PBS 沖洗后加入一定量的 0.25% 胰酶消化，待鏡下觀察細胞變圓且還未漂起時，加入有血清的正常培液終止消化，吹打細胞成細胞懸液后將細胞接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。對于懸浮細胞可以直接傳代也可以離心法傳代。直接傳代是讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。離心法傳代是將細胞連同培養(yǎng)液一并轉移到離心管內(nèi)， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，吹打細胞形成細胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。