常用原代細(xì)胞培養(yǎng)之分散細(xì)胞培養(yǎng)

　　原代細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的是分散細(xì)胞培養(yǎng)之一。分散細(xì)胞培養(yǎng)，即將組織塊用機(jī)械法或化學(xué)法使細(xì)胞分散。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性最好的游離細(xì)胞，經(jīng)典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和膠原酶)消化細(xì)胞間的結(jié)合物，或用金屬離子螯合劑(如EDTA)除去細(xì)胞互相粘著所依賴的Ca2+，再經(jīng)機(jī)械輕度振蕩，使之成為單細(xì)胞。

　　舉例：神經(jīng)細(xì)胞分散培養(yǎng)實(shí)驗-基本技術(shù)指南

　　從神經(jīng)組織解離到建立原代細(xì)胞培養(yǎng)通常需要幾天，甚至數(shù)周。這個過程不僅繁瑣， 還很單調(diào)。其實(shí)還有一種捷徑，幾個小時就能實(shí)現(xiàn)從神經(jīng)組織到體外培養(yǎng)細(xì)胞系的產(chǎn)生。 這個無縫的流程讓研究人員充分利用了寶貴的樣品，同時還有寶貴的時間。本文就舉個例 子，說明一下從組織樣品到細(xì)胞培養(yǎng)的每一步。

　　步驟1：神經(jīng)組織解離

　　神經(jīng)組織的解離是第1步。Neural Tissue Dissociation Kit能夠?qū)⑴咛�、�?nbsp;生或成體來源的組織溫和解離成單細(xì)胞懸液。兩步的酶解過程只需要不到一個小時，就能 產(chǎn)生大量下游分析即用的活細(xì)胞。解離過程可以手工完成，也可自動完成。

　　解離過 程如下：

　　將腦組織切成小塊，收集在HBSS中，300×g離心2分鐘 → 加入預(yù)熱的酶混 合物1，37°C孵育 → 再加入酶混合物2 → 解離(手工解離或自動解離)→ 加到30 μm 細(xì)胞濾器中，用HBSS洗滌兩次

　　步驟2：髓磷脂碎片的去除+神經(jīng)細(xì)胞的分離

　　獲得了單細(xì)胞 懸液之后，下一步就是目的細(xì)胞的分離。在細(xì)胞分離方面，MACS技術(shù)無疑是金標(biāo)準(zhǔn)，目 前發(fā)表的文獻(xiàn)已達(dá)12000多篇。別急，在細(xì)胞分離之前還有一個小插曲。那就是去除對后 續(xù)免疫標(biāo)記有干擾的髓磷脂(myelin)。美天旎最近推出的Myelin Removal Beads能夠從 神經(jīng)細(xì)胞懸液中去除髓磷脂，標(biāo)記+分離的全過程只需要35分鐘。

　　髓磷脂的去除是了為回收率。做過比對實(shí)驗，將步驟1得到的細(xì)胞懸液分成兩組，一組用Myelin Removal Beads處理，一組不處理。然后分別從兩組中分離神經(jīng)前體細(xì)胞。第一組 (處理過)的回收率達(dá)95%，第二組(未處理)只有80%。

　　步驟3：神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng) 分離到了你想要的神經(jīng)細(xì)胞， 下一步就是原代細(xì)胞培養(yǎng)了。