抗原的兩大修復(fù)技術(shù)

　　抗原修復(fù)指的是逆轉(zhuǎn)表位掩蓋和恢復(fù)表位-抗體結(jié)合的技術(shù)。目前有多種技術(shù)可恢復(fù)表位的免疫反應(yīng)性。簡(jiǎn)單的方法有改變抗體稀釋液的pH或陽(yáng)離子濃度，這可能影響抗體與表位的親和力。對(duì)于部分掩蓋的表位，在開始抗原修復(fù)之前可以先試試改變一抗的孵育條件。不過(guò)，這一步也需要抗體濃度、孵育時(shí)間和溫度的進(jìn)一步優(yōu)化。

　　在討論抗體修復(fù)方法時(shí)，技術(shù)通常分為兩大類，蛋白酶誘導(dǎo)的表位修復(fù)(PIER)和熱誘導(dǎo)的表位修復(fù)(HIER)。一旦優(yōu)化好，抗原修復(fù)的影響可能是明顯的。

　　HIER被認(rèn)為能逆轉(zhuǎn)一些交聯(lián)，并實(shí)現(xiàn)表位二級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)的重建。每種組織、固定方法和待研究抗原的實(shí)驗(yàn)方案必須經(jīng)過(guò)優(yōu)化�？偟膩�(lái)說(shuō)，HIER的成功率比PIER要高得多。HIER可利用微波爐、高壓鍋、蒸屜、高壓滅菌鍋或水浴開展。在HIER實(shí)驗(yàn)中，微波爐是越來(lái)越流行的設(shè)備。這些方案大多加熱5分鐘，然后更換緩沖液。對(duì)于所有HIER方法，在開始IHC/ICC孵育之前必須讓玻片冷卻。HIER對(duì)時(shí)間、溫度、緩沖液和pH特別敏感，最佳方法必須根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。

　　在PIER方法中，蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶等都曾成功恢復(fù)抗體與表位的結(jié)合。人們認(rèn)為作用機(jī)制是切割了可能遮蓋表位的肽段。PIER的缺點(diǎn)在于恢復(fù)免疫反應(yīng)性的成功率低，且有可能破壞組織形態(tài)和目的抗原。