工具酶的主要用途

　　在酶學分析中，作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶稱為工具酶。工具酶在酶學分析中具有重要作用。酶偶聯(lián)反應體系中的指示酶和輔助酶即為工具酶。常用的工具酶有氧化還原酶類、轉移酶類和水解酶類，但以氧化還原酶類更多見，因為其產物最易被直接監(jiān)測而成為指示酶。

　　在臨床生物化學檢驗中，許多項目的測定往往使用有工具酶的參與的類似的反應原理，即所謂共通(或通用)反應途徑。在分光光度法中，最常用的兩類通用反應途徑如下：

　　1.NAD(P)+或NAD(P)H偶聯(lián)的脫氫酶及其指示反應許多氧化還原反應，尤其是有作為工具酶的脫氫酶(如LD、GLD、G6PD等)參與時，常將底物去除的氫原子傳遞給NAD(P)+而形成NAD(P)H。NAD(P)H不僅在340nm有特征性光吸收，可用分光光度法進行檢測，而且用 365nm波長的紫外光激發(fā)，可使其在460nm發(fā)射強烈熒光并進行測定。目前應用的測定項目有：葡萄糖、尿素、b-羥丁酸、甘油三酯、甲醇、血氨、 ALT、AST、LD、GLD、CK、ALD、G6PD和ICD等。

　　2.偶聯(lián)H2O2的工具酶及其指示反應臨床化學測定中，葡萄糖、尿酸、膽固醇、甘油、丙酮酸的測定，可分別利用相應的工具酶將其氧化產生H2O2;H2O2再通過以氫(或電子)為受體的指示酶和以NAD(P)H為輔酶參與的兩類指示反應進行檢測。前者主要有兩類工具酶參與反應：過氧化氫酶或稱觸酶(catalase)及過氧化物酶(peroxidase，POD)，兩者均為含三價鐵的指示酶。以指示酶POD最為常用。H2O2在POD的直接催化下，氧化芳香族胺色素原生成有色的色素，如POD催化H2O2與4-氨基安替比林(4-AAP)和酚反應生成醌亞胺(紅色)，最大吸收峰在500nm。這一反應由Trinder在1969年提出，故稱為Trinder反應。