普通PCR、梯度PCR、熒光定量PCR儀的區(qū)別及運用

　　PCR：即合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction），利用DNA在體外95℃時解旋（變性），55℃時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合（退火），再調(diào)溫度至72℃左右，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖（5'-3'）的方向合成互補鏈（延伸）。
　　PCR儀實際就是一個溫控設(shè)備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。
　　根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測的標(biāo)準(zhǔn)可以將PCR儀分為：普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR，實時熒光定量PCR儀等幾類。

　　普通PCR儀：
　　一般把一次PCR擴(kuò)增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀，也就是傳統(tǒng)的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。
　　普通PCR儀主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗、檢疫等。

　　梯度PCR儀：
　　一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其最適合的退火溫度不同，通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的最適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。
    梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這樣既節(jié)約時間，也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)，檢驗、檢疫等。

　　原位PCR儀：
　　PCR是提取細(xì)胞或組織中的DNA進(jìn)行基因擴(kuò)增反應(yīng)，而原位PCR是保持細(xì)胞或組織的完整性，使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞的靶DNA所在的位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。不但可以檢測到靶DNA，而且還可以了解靶DNA存在于何種細(xì)胞中，更有利于探討靶DNA與細(xì)胞之間的關(guān)系。
　　原位PCR儀，主要應(yīng)用于：（1）檢測外源性基因片段，提高檢出率，集中在病毒感染的檢查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等；（2）觀察病原體在體內(nèi)分布規(guī)律（3）內(nèi)源性基因片段，如人體的單基因病、重組基因、易位的染色體、Ig的mRNA片段、癌基因片段等。（4）檢測導(dǎo)入基因；（5）遺傳病基因檢測如β-地中海貧血。 

　　實時熒光定量PCR儀：
　　在普通PCR儀設(shè)計基礎(chǔ)上增加熒光信號采集系統(tǒng)和計算機(jī)分析處理系統(tǒng)，形成了具有熒光定量功能的PCR儀器。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR擴(kuò)增原理相同，在PCR擴(kuò)增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記，使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機(jī)分析處理系統(tǒng)，得出量化的實時結(jié)果輸出。
　　熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候，選用單通道；有多種熒光標(biāo)記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因為一次只能檢測一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR，實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
　　熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。熒光定量檢測技術(shù)在臨床診斷方面很多，主要集中在各種病原體引起疾病的臨床診斷，如肝炎類疾病、性病、與優(yōu)生優(yōu)育相關(guān)的疾病以及肺結(jié)核等等。