Western Blot哪種染色好？

　　蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。Western Blot哪種染色好？您可知道？廣州市深華生物技術有限公司為您最新解析：

　　（1）陰離子染料是最常用的，特別是氨基黑，脫色快，背景低檢測極限可達到1.5μg，考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度，但脫色慢，背景高。麗春紅s和快綠在檢測后容易從蛋白質中除去，以便進行隨后的氨基酸分析。缺點是溶劑系統(tǒng)的甲醇會引起硝化纖維素膜的皺縮或破壞。不能用于正電荷的膜。靈敏度低。
　　（2）膠體金，靈敏度高，檢測范圍可到pg級，但染色比穩(wěn)定。
　　（3）生物素化靈敏度位于1、2之間，可用于任何一種膜。

　　Western Blot顯色的方法主要有以下幾種：
　　i. 放射自顯影
　　ii. 底物化學發(fā)光ECL
　　iii. 底物熒光ECF
　　iv. 底物DAB呈色
　　現(xiàn)常用的有底物化學發(fā)光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，發(fā)表文章通常是用底物化學發(fā)光ECL。只要買現(xiàn)成的試劑盒就行，操作也比較簡單，原理如下（二抗用HRP標記）：反應底物為過氧化物+魯米諾，如遇到HRP，即發(fā)光，可使膠片曝光，就可洗出條帶。

　　值得一提的是，western blot 這個名稱的由來很有意思。最開始做印跡工作的是一個叫做Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southern blot，后來類似的出現(xiàn)了兩個過程相似，但是對象不同的印跡方法，一個針對RNA，一個針對蛋白質，人們分別把這兩種技術稱為Northern和Western，與這兩個技術的發(fā)明人沒有關系了。