原代細(xì)胞培養(yǎng)中的6個常見錯誤

當(dāng)培養(yǎng)原代細(xì)胞時(shí)，重要的是要記住，他們不是細(xì)胞系，不能同等對待。因?yàn)镾cienCell在原代細(xì)胞培養(yǎng)方面的廣泛工作，我們非常熟悉研究人員在培養(yǎng)原代細(xì)胞時(shí)遇到的常見問題。這里有六個在原代細(xì)胞培養(yǎng)中的常見錯誤，以及如何糾正這些錯誤。
 
錯誤＃1：一小管原代細(xì)胞在水浴中解凍一段時(shí)間

糾正＃1：原代細(xì)胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴中，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶，并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細(xì)胞，并置于培養(yǎng)箱中。
 
錯誤＃2：解凍小瓶后直接離心原代細(xì)胞

糾正＃2：我們不建議在解凍后離心細(xì)胞，因?yàn)殡x心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復(fù)原代細(xì)胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。
 
錯誤＃3：允許原代細(xì)胞變得過于融合

糾正＃3：當(dāng)生長至100％匯合時(shí)，原代細(xì)胞可以變得衰老。記住，原代細(xì)胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細(xì)胞的生長。我們建議在細(xì)胞達(dá)到90-95％融合時(shí)，對原代細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
       
錯誤＃4：傳代原代細(xì)胞時(shí)過度胰蛋白酶消化

糾正＃4：當(dāng)細(xì)胞傳代時(shí)，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細(xì)胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細(xì)胞中的胰酶，因?yàn)槿魏位钚缘囊鹊鞍酌付紝p傷細(xì)胞。我們特別推薦專門為原代細(xì)胞配制的胰蛋白酶中和溶液（Cat＃0113），但也可以使用10％血清或大豆胰蛋白酶抑制劑（Cat＃0173）。
 
錯誤＃5：原代細(xì)胞可以很容易地重新凍存

糾正＃5：通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓�。原代�?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。
 
錯誤6：原代細(xì)胞可以無限的增殖

糾正＃6：與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力。我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個增值困難的細(xì)胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可能隨著時(shí)間的推移，大量生長從而成為主要細(xì)胞。
 
在培養(yǎng)原代細(xì)胞時(shí)，記住這六個技術(shù)提示是非常重要的。最終，如果你認(rèn)真、仔細(xì)的對待你的細(xì)胞，它們也會更好地為你的實(shí)驗(yàn)服務(wù)。